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产品说明
本产品包括种种酶法组织消化中常用的胶原酶等卵白酶,,,能特异性地降解胞外胶原卵白,,,使胶原卵白和纤维粘连卵白的网状结构解离,,,而不损坏细胞外貌结构的完整性。。。。。。使用本产品举行组织消化可以使组织中细胞间的桥连结构松动,,,使组织由块状酿成絮状,,,经由机械奏乐后制成少量细胞群团和大宗单个细胞的细胞悬液。。。。。。制备的细胞悬液可用于原代作育、流式细胞仪举行细胞生物学(如凋亡、增殖、细胞周期等)研究。。。。。。适用规模:种种正常乳腺和乳腺肿瘤组织,,,从中疏散获得原代细胞,,,包括上皮细胞,,,间质细胞,,,成纤维细胞等。。。。。。
使用说明
-20℃避光生涯6个月内有用。。。。。。
(1)提前将消化酶从-20℃冰箱取出置于2-8℃融化;;;;
(2)将冰盒外貌消毒后移入超净台内。。。。。。在无菌条件下,,,冰上在作育皿中将组织样本置于组织洗濯液内洗濯3~5 s。。。。。。
(3)在无菌条件下,,,将洗濯后的组织样本浸没在盛有10 ml组织洗濯液的作育皿中。。。。。。冰上接纳无菌手术刀将样本机械切割成1~2 mm3巨细后,,,将样品碎块转移至50 mL无菌离心管中;;;;
(4)加入10~20 mL组织洗濯液于离心管中,,,1200 rpm 4℃离心5 min;;;;
(5)弃上清,,,加入10~30 mL本消化酶(消化酶体积至少为组织体积的5倍),,,标记样本名称及编号并用封口膜封口,,,放入恒温振荡作育箱中消化,,,设置参数37 ℃、100~200 rpm(凭证样实质地设置转速),,,待组织消化至泛起团絮状(一般1小时左右),,,即可终止消化;;;;
(6)取出消化好的样本,,,加入5 mL含血清DMEM作育基,,,100 μm细胞筛网过滤。。。。。。
(7)将过筛后的细胞悬液于350 g常温离心5 min。。。。。。
(8)弃上清后,,,细胞沉淀加入原代细胞作育基待用。。。。。。
注重事项
1. 本产品通例在-20℃生涯。。。。。。使用前需在2-8℃融化,,,融化后需在一周内使用完毕。。。。。。
2. 使用本产品时应注重无菌操作,,,阻止污染。。。。。。
3. 为坚持本产品的最佳使用效果,,,一般在37℃条件下使用,,,凭证详细实验情形也可在2-8℃条件下使用。。。。。。
4. 本产品的消化时间需要凭证样品巨细举行探索,,,关于珍贵样品,,,为抵达最佳的疏散效果,,,可接纳二次分步消化方式(即将首次消化的组织残渣网络后,,,重复如上操作方法1~8)。。。。。。
5. 请于保质期内使用本产品,,,凌驾保质期后,,,将无法抵达理想的使用效果。。。。。。
6. 本产品仅用于科研用途,,,不可用于体外诊断。。。。。。
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